实验室规划设计--PCR实验室建设方案、规划设计
PCR试验室又名基因扩增试验室。PCR是聚合酶链式反响(PolymeraseChainReaction)的简称。是一种分子生物学技能，用于扩大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA仿制。经过DNA基因追寻体系，能敏捷掌握患者体内的病毒含量，其精确度高达纳米等级，精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否仿制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否反常改动能及时判别患者最适合运用哪类抗病毒药物、判别药物疗效怎么、给临床治疗供给了可靠的查验根据。规范的PCR试验室规划是什么样的?
展开PCR试验室应具有的条件
1、有必要具有规范的的PCR荧光试验室;
实时荧光定量PCR技能于1996年由美国AppliedBiosystems公司推出 因为该技能不只实现了PCR从定性到定量的飞跃，并且与常规PCR比较，它有特异性更强、有用解决PCR污染问题、主动化程度高级特色，现在已得到广泛运用。
2、检测设备有必要契合规范PCR荧光试验室设置要求;
荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+主动剖析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测体系。
3、有必要经过国家临床查验中心的查验和认证;
4、检测人员有必要经过国家临检中心业务培训并获得合格证书;
PCR试验室内工作人员有必要参加由国家卫生部或各省临床查验中心举行的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR试验室经过查验，试验室至少有必要应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR试验室有必要树立严厉的试验室管理制度、树立规范化操作程序（SOP）、树立系列质量管理文件等，保证试验室日常运转契合国家卫生部的要求，保证检测成果精确、保证试验室卫生安全，保证试验室长期安稳运转
5、有必要在无菌无尘环境下进行操作
下面介绍怎么树立PCR试验室
1、树立样品预备区
这个区域专门用作样品的预备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采纳预防措施：
⑴PCR产品和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。
⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品预备间处理，以根据运用的需求提取DNA或RNA。
⑶用于样品处理的东西不能被用作一般分子克隆的东西，也不能用作操作靶序列。
⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在汲取样品时有气溶胶遗留。
⑸大体积样品应该用独自包装的无菌一次性移液管汲取。
⑹管子翻开前都要简略离心以削减气溶胶的发生，并且管子不能用力崩开，这样会发生气溶胶。
⑺任何时候都应该穿试验服和带手套，手套要常常替换，尤其在抽提过程中每一步之间都要替换。试验服要专门用于样品预备间，常常清洗。
2、样品预备和RNA-PCRRNA-PCR的额定过程需求额定的样品操作，这样增加了样品之间污染的时机。为了防止这一问题，反转录一步能够在样品预备区进行。在RNA-PCR中运用UNG以防止污染的办法也有报导。
3、树立前PCR区。
该去专门用于预备各种反响，这个区域有必要坚持洁净，并且没有来自克隆和样品预备的污染。前PCR区有必要要有试剂和预备，特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、PCR试验室试剂的操作。
⑴所用的一切溶液都应该没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。
⑵一切PCR试剂中运用的水都应该是高质量的－新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。
⑶在20℃到25℃储存的试剂主张加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中参加0.025%的叠氮钠不按捺扩增反响。
⑷所用试剂都应该以大体积制造，试验一下看试剂是否满足，然后分装成仅够一次运用的量进行储存。
⑸一切试剂和样品预备过程中都要运用一次性灭菌的瓶子和管子。
⑹新制造的试剂在用于预备新的标本之前应该加以查验。
⑺样品预备和前PCR区所运用的移液管在不运用时都应该当心保存。
5、在前PCR区树立PCR混合物。
⑴能够把立刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃，在试验室只涉及到扩增一种或少量几种特异序列时这样做很有用。
⑵假如你的试验室运用多套引物，以致于制造包含一切试剂的单一反响混合物不行经济，能够考虑分装保存够一天的PCR成分。
⑶作为一个规矩，应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来剖析样品制造和PCR前过程的功率和洁净程度。并且，你也希望经过运用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里边不含扩增按捺物。
⑷阴性样品要与每组样品一起做，以剖析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产品的污染，阴性对照应该包含核酸以外的一切试剂。
⑸作为阳性对照时，有两个理由决定了应该运用最少量量的核酸。
⑹因为有必要有对照反响，对照模板的特色应该予以考虑。
6、操控污染的办法。
已规划出很有力的酶学办法用来消除一种方式的污染—运用UNG，这一技能能有用地消除由PCR产品引起的污染。另一种操控污染的办法是运用紫外线，这种办法不能彻底消除污染问题，但能够将污染下降几个数量级。
7、后PCR区PCR完结今后，需求剖析样品并解说数据，应该留出一个专门用于反响后处理样品的当地。后PCR活动中运用的所用试剂、一次性耗材和仪器都有必要是专门用于这一意图，决不能把试验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。
展开PCR试验室应具有的条件
1、有必要具有规范的的PCR荧光试验室;
实时荧光定量PCR技能于1996年由美国AppliedBiosystems公司推出 因为该技能不只实现了PCR从定性到定量的飞跃，并且与常规PCR比较，它有特异性更强、有用解决PCR污染问题、主动化程度高级特色，现在已得到广泛运用。
2、检测设备有必要契合规范PCR荧光试验室设置要求;
荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+主动剖析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测体系。
3、有必要经过国家临床查验中心的查验和认证;
4、检测人员有必要经过国家临检中心业务培训并获得合格证书;
PCR试验室内工作人员有必要参加由国家卫生部或各省临床查验中心举行的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR试验室经过查验，试验室至少有必要应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR试验室有必要树立严厉的试验室管理制度、树立规范化操作程序（SOP）、树立系列质量管理文件等，保证试验室日常运转契合国家卫生部的要求，保证检测成果精确、保证试验室卫生安全，保证试验室长期安稳运转
5、有必要在无菌无尘环境下进行操作
下面介绍怎么树立PCR试验室
1、树立样品预备区
这个区域专门用作样品的预备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采纳预防措施：
⑴PCR产品和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。
⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品预备间处理，以根据运用的需求提取DNA或RNA。
⑶用于样品处理的东西不能被用作一般分子克隆的东西，也不能用作操作靶序列。
⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在汲取样品时有气溶胶遗留。
⑸大体积样品应该用独自包装的无菌一次性移液管汲取。
⑹管子翻开前都要简略离心以削减气溶胶的发生，并且管子不能用力崩开，这样会发生气溶胶。
⑺任何时候都应该穿试验服和带手套，手套要常常替换，尤其在抽提过程中每一步之间都要替换。试验服要专门用于样品预备间，常常清洗。
2、样品预备和RNA-PCRRNA-PCR的额定过程需求额定的样品操作，这样增加了样品之间污染的时机。为了防止这一问题，反转录一步能够在样品预备区进行。在RNA-PCR中运用UNG以防止污染的办法也有报导。
3、树立前PCR区。
该去专门用于预备各种反响，这个区域有必要坚持洁净，并且没有来自克隆和样品预备的污染。前PCR区有必要要有试剂和预备，特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、PCR试验室试剂的操作。
⑴所用的一切溶液都应该没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。
⑵一切PCR试剂中运用的水都应该是高质量的－新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。
⑶在20℃到25℃储存的试剂主张加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中参加0.025%的叠氮钠不按捺扩增反响。
⑷所用试剂都应该以大体积制造，试验一下看试剂是否满足，然后分装成仅够一次运用的量进行储存。
⑸一切试剂和样品预备过程中都要运用一次性灭菌的瓶子和管子。
⑹新制造的试剂在用于预备新的标本之前应该加以查验。
⑺样品预备和前PCR区所运用的移液管在不运用时都应该当心保存。
5、在前PCR区树立PCR混合物。
⑴能够把立刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃，在试验室只涉及到扩增一种或少量几种特异序列时这样做很有用。
⑵假如你的试验室运用多套引物，以致于制造包含一切试剂的单一反响混合物不行经济，能够考虑分装保存够一天的PCR成分。
⑶作为一个规矩，应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来剖析样品制造和PCR前过程的功率和洁净程度。并且，你也希望经过运用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里边不含扩增按捺物。
⑷阴性样品要与每组样品一起做，以剖析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产品的污染，阴性对照应该包含核酸以外的一切试剂。
⑸作为阳性对照时，有两个理由决定了应该运用最少量量的核酸。
⑹因为有必要有对照反响，对照模板的特色应该予以考虑。
6、操控污染的办法。
已规划出很有力的酶学办法用来消除一种方式的污染—运用UNG，这一技能能有用地消除由PCR产品引起的污染。另一种操控污染的办法是运用紫外线，这种办法不能彻底消除污染问题，但能够将污染下降几个数量级。
7、后PCR区PCR完结今后，需求剖析样品并解说数据，应该留出一个专门用于反响后处理样品的当地。后PCR活动中运用的所用试剂、一次性耗材和仪器都有必要是专门用于这一意图，决不能把试验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。
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